Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 039615

   Библиографические данные
(11)039615    (13) B1
(21)201990091

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2022.02.17
Текущий бюллетень: 2022-02  
Все публикации: 039615  
Реестр евразийского патента: 039615  

(22)2017.07.27
(51) C08B 37/08 (2006.01)
A61K 31/728(2006.01)
(43)A1 2019.05.31 Бюллетень № 05  тит.лист, описание 
(45)B1 2022.02.17 Бюллетень № 02  тит.лист, описание 
(31)102016000079633
(32)2016.07.28
(33)IT
(86)IB2017/054577
(87)2018/020458 2018.02.01
(71)ФИДИЯ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.П.А. (IT)
(72)Питтарелло Мара, Бориле Франческо, Корса Винченца (IT)
(73)ФИДИЯ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.П.А. (IT)
(74)Носырева Е.Л. (RU)
(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И ОЧИСТКИ НАТРИЕВОЙ СОЛИ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ
   Формула 
(57) 1. Способ получения и очистки натриевой соли гиалуроновой кислоты (НА) из ферментационного бульона Streptococcus или Bacillus, включающий следующие стадии:
A) инактивация ферментационного бульона, предусматривающая следующие стадии:
А1) подкисление ферментационного бульона до значения pH 4-5;
А2) удаление биомассы Streptococcus или Bacillus посредством по меньшей мере одной фильтрации;
A3) обеспечение нейтрализации до значения pH 6,5-7,5;
B) экстрагирование, предусматривающее следующие стадии:
B1) добавление целита к среде, содержащей неочищенную НА, и добавление цетилпиридиния хлорида (СРС) в количестве 4-20 г/л с образованием комплекса НА-СРС при перемешивании в течение по меньшей мере 30 мин и последующее осаждение в течение по меньшей мере дополнительных 30 мин;
B2) удаление жидкой фазы, образованной на стадии В1;
B3) растворение НА, присутствующей в твердой фазе, в водном растворе NaCl и сбор первого экстракта в виде натриевой соли НА; причем данную процедуру B3 осуществляют от 1 до 4 раз;
B4) объединение экстрактов, полученных на стадии/стадиях В3;
B5) добавление ароматической смолы, характеризующейся радиусом пор в диапазоне от 200 до 300 Å, к объединенным экстрактам из стадии В4, при этом их оставляют перемешиваться в течение по меньшей мере 8 ч;
B6) фильтрация смеси, полученной на стадии В5;
С) очистка, предусматривающая следующие стадии:
С1) добавление водного раствора NaOH к фильтрату, полученному на стадии В6;
С2) обеспечение нейтрализации до значения pH в диапазоне от 8 до 9;
С3) по меньшей мере одна фильтрация;
С4) осаждение и по меньшей мере одна промывка натриевой соли НА, полученной на стадии С3, этанолом, конечная промывка в органическом растворителе;
С5) высушивание натриевой соли НА.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что ферментационный бульон Streptococcus представляет собой ферментационный бульон Streptococcus equi подвида equi 68222, мутант Н-1.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что фаза инактивации предусматривает тепловую обработку ферментационного бульона путем нагревания для получения НА с высокой, средней или низкой вязкостью.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что тепловую обработку выполняют путем повышения температуры бульона до 60±5°С в течение 5-40 мин, причем тепловую обработку предпочтительно выполняют при 65°С в течение 5-30 мин.
5. Способ по п.3, отличающийся тем, что тепловую обработку выполняют путем повышения температуры бульона до 70±5°С в течение 5-40 мин, причем тепловую обработку предпочтительно выполняют при 70°С в течение 5-30 мин.
6. Способ по п.3, отличающийся тем, что тепловую обработку выполняют путем повышения температуры бульона до 90±5°С в течение 150-300 мин.
7. Способ по любому из пп.1, 2, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
А) инактивация ферментационного бульона, предусматривающая следующие стадии:
А1) подкисление бульона до значения pH 4-5, причем предпочтительно применяют 1н. HCl;
А2) возможная тепловая обработка бульона при перемешивании;
A3) удаление биомассы Streptococcus или Bacillus посредством фильтрации через подушки из целита в количестве от 20 до 60 г/л бульона, предпочтительно 30-40 г/л, возможная фильтрация с применением фильтров, характеризующихся тонкостью фильтрации 0,5 мкм, причем полипропиленовые фильтры являются предпочтительными;
А4) обеспечение нейтрализации до значения pH 6,5-7,5, предпочтительно с помощью 20% водного раствора NaOH;
B) экстрагирование, предусматривающее следующие стадии:
B1) добавление к нейтрализованному фильтрату из стадии А4 целита в количестве от 20 до 60 г/л бульона и добавление СРС в количестве 4-20 г/л, предпочтительно 5-15 г/л, с образованием комплекса НА-СРС, при перемешивании в течение по меньшей мере 30 мин и последующее осаждение в течение по меньшей мере дополнительных 30 мин;
B2) удаление жидкой фазы;
B3) растворение НА, присутствующей в твердой фазе, в 0,3М водном растворе NaCl при перемешивании в течение периода в диапазоне от 4 до 24 ч, фильтрация посредством фильтров, характеризующихся тонкостью фильтрации 3 мкм, и сбор первого экстракта в виде натриевой соли НА; причем данную процедуру В3 осуществляют от 1 до 4 раз;
B4) объединение экстрактов;
B5) добавление ароматической смолы, характеризующейся радиусом пор в диапазоне от 200 до 300 Å, в количестве от 10 до 60 г/л экстракта к объединенным экстрактам из стадии В4, причем смола, состоящая из сшитых полистирольных матриц, является предпочтительной, при этом их оставляют перемешиваться в течение по меньшей мере 8 ч;
B6) стадии фильтрации, предусматривающие применение фильтровальных тканей, также возможно применение фильтров с тонкостью фильтрации 3 мкм, причем полипропиленовые фильтры являются предпочтительными;
С) очистка, предусматривающая следующие стадии:
С1) добавление 0,2-0,4М NaOH в воде при перемешивании к отфильтрованному продукту из стадии В6;
С2) обеспечение нейтрализации до значения pH в диапазоне от 8 до 9, предпочтительно с помощью HCl;
С3) фильтрация, причем тонкость фильтрации, равная 3 мкм, является предпочтительной, причем полипропиленовые фильтры являются более предпочтительными;
С4) осаждение и по меньшей мере одна промывка натриевой соли НА, полученной на стадии С3, этанолом, конечная промывка в органическом растворителе, предпочтительно ацетоне;
С5) высушивание натриевой соли НА предпочтительно при температуре от 25 до 40°С в течение не менее 15 ч, под вакуумом.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что на стадии А1 подкисление проводят с помощью HCl.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что на стадии A3 обеспечение нейтрализации проводят с помощью NaOH.
10. Способ получения и очистки натриевой соли НА из гребней петухов, включающий следующие стадии:
A) тепловая обработка гомогената гребней петухов путем нагревания и одновременное ферментативное расщепление для получения НА с высокой, средней или низкой вязкостью;
B) экстрагирование, предусматривающее следующие стадии:
B1) добавление целита к среде, содержащей неочищенную НА, и добавление цетилпиридиния хлорида (СРС) в количестве 4-20 г/л с образованием комплекса НА-СРС при перемешивании в течение по меньшей мере 30 мин и последующее осаждение в течение по меньшей мере дополнительных 30 мин;
B2) удаление жидкой фазы, образованной на стадии В1;
B3) растворение НА, присутствующей в твердой фазе, в водном растворе NaCl и сбор первого экстракта в виде натриевой соли НА; причем данную процедуру В3 осуществляют от 1 до 4 раз;
B4) объединение экстрактов, полученных на стадии/стадиях В3;
B5) добавление ароматической смолы, характеризующейся радиусом пор в диапазоне от 200 до 300 Å, к объединенным экстрактам из стадии В4, при этом их оставляют перемешиваться в течение по меньшей мере 8 ч;
B6) фильтрация смеси, полученной на стадии В5;
C) очистка, предусматривающая следующие стадии:
С1) добавление водного раствора NaOH к фильтрату, полученному на стадии В6;
С2) обеспечение нейтрализации до значения pH в диапазоне от 8 до 9;
С3) по меньшей мере одна фильтрация;
С4) осаждение и по меньшей мере одна промывка натриевой соли НА, полученной на стадии С3, этанолом, конечная промывка в органическом растворителе;
С5) высушивание натриевой соли НА.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что тепловую обработку осуществляют путем повышения температуры до 50-60°С в течение 26-30 ч, причем тепловую обработку предпочтительно выполняют при 55°С в течение 28 ч.
12. Способ по п.10, отличающийся тем, что тепловую обработку осуществляют путем повышения температуры до 60-65°С в течение 28-30 ч, причем тепловую обработку предпочтительно выполняют при 60°С в течение 30 ч.
13. Способ по п.10, отличающийся тем, что тепловую обработку осуществляют путем повышения температуры до 65-70°С в течение 46-50 ч, причем тепловую обработку предпочтительно выполняют при 65°С в течение 48 ч.
14. Способ по любому из пп.1, 10-13, отличающийся тем, что стадии С очистки предшествуют осаждение натриевой соли НА, полученной на стадии В, в этаноле, удаление растворителя и растворение осадка в очищенной воде.
15. Способ по п.10, отличающийся тем, что стадии В экстрагирования предшествуют тепловая обработка гомогената гребней путем нагревания и одновременное ферментативное расщепление для получения НА с высокой, или средней, или низкой вязкостью, причем он включает следующие стадии:
В) экстрагирование, предусматривающее следующие стадии:
В1) добавление к продукту ферментативного расщепления целита в количестве от 20 до 60 г/л гомогената, подвергнутого ферментативному расщеплению, и добавление СРС в количестве от 4 до 20 г/л, предпочтительно 5-15 г/л, с образованием комплекса НА-СРС при перемешивании в течение по меньшей мере 30 мин и последующее осаждение в течение по меньшей мере дополнительных 30 мин;
B2) удаление жидкой фазы;
B3) растворение НА, присутствующей в твердой фазе, в 0,3М водном растворе NaCl при перемешивании в течение периода в диапазоне 4-24 ч, фильтрация посредством фильтров, характеризующихся тонкостью фильтрации 3 мкм, и сбор первого экстракта в виде натриевой соли НА; причем данную процедуру В3 осуществляют от 1 до 4 раз;
B4) объединение экстрактов, полученных на стадии/стадиях В3;
B5) добавление ароматической смолы, характеризующейся радиусом пор в диапазоне от 200 до 300 Å, в количестве от 10 до 60 г/л экстракта к объединенным экстрактам из стадии В4, предпочтительно смолы, состоящей из сшитых полистирольных матриц, при этом их оставляют перемешиваться в течение по меньшей мере 8 ч;
B6) стадии фильтрации, предусматривающие применение фильтровальных тканей, также возможно применение фильтров с тонкостью фильтрации 3 мкм, причем полипропиленовые фильтры являются предпочтительными;
С) очистка, предусматривающая следующие стадии:
С1) добавление 0,2-0,4М NaOH в воде при перемешивании к отфильтрованному продукту из стадии В6;
С2) обеспечение нейтрализации до значения pH в диапазоне от 8 до 9, предпочтительно с помощью HCl;
С3) фильтрация, причем тонкость фильтрации, равная 3 мкм, является предпочтительной, предпочтительно с применением полипропиленовых фильтров;
С4) осаждение и по меньшей мере одна промывка натриевой соли НА, полученной на стадии С3, этанолом, конечная промывка в органическом растворителе, предпочтительно ацетоне;
С5) высушивание натриевой соли НА, предпочтительно при температуре от 25 до 40°С в течение не менее 15 ч, под вакуумом.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что стадии С очистки предшествуют осаждение натриевой соли НА, полученной на стадии В экстрагирования, в этаноле, удаление растворителя и растворение осадка в очищенной воде.
17. Способ по п.1 или 10, отличающийся тем, что на стадии В5 смола состоит из сшитых полистирольных матриц.
18. Способ по п.1 или 10, отличающийся тем, что на стадии С2 обеспечение нейтрализации проводят с помощью HCl.
19. Способ по п.1 или 10, отличающийся тем, что на стадии С4 органический растворитель представляет собой ацетон.
20. Способ по п.1 или 10, отличающийся тем, что на стадии С5 высушивание натриевой соли НА проводят при температуре от 25 до 40°С в течение не менее 15ч, под вакуумом.