(57) 1. Не встречающаяся в природе система CRISPR-Cas для направления РНК-направленной нуклеазы к последовательности-мишени в клетке, где система содержит вектор, содержащий двунаправленный промотор, где двунаправленный промотор содержит:
a) контрольные элементы, которые обеспечивают транскрипцию в одном направлении по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей РНК-проводник (пРНК) системы CRISPR-Cas, где пРНК гибридизируется с последовательностью-мишенью молекулы ДНК в клетке;
b) контрольные элементы, которые обеспечивают транскрипцию в противоположном направлении нуклеотидной последовательности, кодирующей РНК-направленную нуклеазу,
где пРНК направленно действует на последовательность-мишень и гибридизируется с нею и направляет РНК-направленную нуклеазу к молекуле ДНК.
2. Система по п.1, где двунаправленный промотор представляет собой двунаправленный промотор H1.
3. Система по п.1, где последовательность-мишень содержит нуклеотидную последовательность AN₁₉NGG, GN₁₉NGG, CN₁₉NGG или TN19NGG.
4. Система по п.1, где РНК-направленная нуклеаза представляет собой белок Cas9.
5. Система по п.4, где белок Cas9 представляет собой кодон, оптимизированный для экспрессии в клетке, и/или представляет собой белок Cas9 типа II.
6. Система по п.1, где клетка представляет собой эукариотическую клетку, необязательно выбранную из группы, состоящей из (i) клетки млекопитающего, (ii) человеческой клетки и/или (iii) фоторецепторной клетки сетчатки.
7. Система по п.1, где молекула ДНК кодирует один или несколько генных продуктов, экспрессируемых в клетке.
8. Система по п.7, где РНК-направленная нуклеаза расщепляет молекулу ДНК для изменения экспрессии одного или нескольких генных продуктов.
9. Система по п.8, где экспрессия одного или нескольких генных продуктов снижается.
10. Система по п.1, где система упакована в единичную частицу адено-ассоциированного вируса (AAV).
11. Способ для направления РНК-направленной нуклеазы к последовательности-мишени в клетке, включающий в себя введение в клетку не встречающейся в природе системы CRISPR-Cas, содержащей вектор, содержащий двунаправленный промотор, где двунаправленный промотор содержит:
a) контрольные элементы, которые обеспечивают транскрипцию в одном направлении по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей РНК-проводник (пРНК) системы CRISPR-Cas, где пРНК гибридизируется с последовательностью-мишенью молекулы ДНК; и
b) контрольные элементы, которые обеспечивают транскрипцию в противоположном направлении нуклеотидной последовательности, кодирующей РНК-направленную нуклеазу,
где пРНК целенаправленно воздействует на последовательность-мишень, гибридизируется с нею и направляет РНК-направленную нуклеазу к молекуле ДНК.
12. Способ по п.11, где двунаправленный промотор представляет собой двунаправленный промотор H1.
13. Способ по п.11, где последовательность-мишень содержит нуклеотидную последовательность AN₁₉NGG, GN₁₉NGG, CN₁₉NGG или TN₁₉NGG.
14. Способ по п.11, где РНК-направленная нуклеаза представляет собой белок Cas9.
15. Способ по п.14, где белок Cas9 представляет собой кодон, оптимизированный для экспрессии в клетке, и/или представляет собой белок Cas9 типа II.
16. Способ по п.11, где клетка представляет собой эукариотическую клетку, необязательно выбранную из группы, состоящей из (i) клетки млекопитающего, (ii) человеческой клетки и/или (iii) фоторецепторной клетки сетчатки.
17. Способ по п.11, где молекула ДНК кодирует один или несколько генных продуктов, экспрессируемых в клетке.
18. Способ по п.17, где РНК-направленная нуклеаза расщепляет молекулу ДНК для изменения экспрессии одного или нескольких генных продуктов.
19. Способ по п.18, где экспрессия одного или нескольких генных продуктов снижается.
20. Способ по п.11, где система упакована в единичную частицу адено-ассоциированного вируса (AAV).

---