Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 040764

   Библиографические данные
(11)040764    (13) B1
(21)201991976

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2022.07.26
Текущий бюллетень: 2022-07  
Все публикации: 040764  
Реестр евразийского патента: 040764  

(22)2014.10.10
(51) C12N 5/02 (2006.01)
C12N 5/16(2006.01)
(43)A1 2020.04.02 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(45)B1 2022.07.26 Бюллетень № 07  тит.лист, описание 
(31)61/889,815
(32)2013.10.11
(33)US
(62)201690600; 2014.10.10
(71)РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(72)Лоуренс Шон, Ким Энн, Джонсон Эми (US)
(73)РЕГЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)
(74)Угрюмов В.М., Глухарёва А.О., Гизатуллина Е.М., Строкова О.В., Лебедев В.В., Костюшенкова М.Ю., Гизатуллин Ш.Ф., Парамонова К.В. (RU)
(54)МЕТАБОЛИЧЕСКИ ОПТИМИЗИРОВАННАЯ КЛЕТОЧНАЯ КУЛЬТУРА
   Формула 
(57) 1. Способ получения представляющего интерес белка, предусматривающий
(a) культивирование клеток, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный представляющий интерес белок, в первой клеточной культуре;
(b) определение того, что в указанной первой клеточной культуре произошел метаболический сдвиг на потребление лактата;
(c) перенос клеток из указанной первой клеточной культуры во вторую клеточную культуру, после того как произошел указанный метаболический сдвиг на потребление лактата;
(d) поддержание указанной второй клеточной культуры в течение периода времени, так чтобы указанный представляющий интерес белок накапливался в указанной второй клеточной культуре;
(e) сбор указанного представляющего интерес белка из указанной второй клеточной культуры; и
(f) очистку указанного представляющего интерес белка.
2. Способ по п.1, причем концентрация лактата во второй клеточной культуре указывает на чистое потребление лактата.
3. Способ по п.1 или 2, при котором клетки выбраны из группы, состоящей из клеток СНО, COS, ретинальных клеток, клеток Vero, CV1, HEK293, 293 EBNA, MSR 293, MDCK, HaK, BHK21, HeLa, HepG2, WI38, MRC 5, Colo25, HB 8065, HL-60, Jurkat, Daudi, A431, CV-1, U937, 3T3, клетки L, клетки С127, клеток SP2/0, NS-0, ММТ, PER.C6, мышиных лимфоидных и мышиных гибридомных клеток.
4. Способ по п.3, при котором клетки представляют собой клетки СНО.
5. Способ по любому из пп.1-4, при котором представляющий интерес белок выбран из группы, состоящей из антитела, антигенсвязывающего белка, слитого белка, содержащего Fc слитого белка и содержащего рецептор Fc слитого белка.
6. Способ по п.5, при котором представляющий интерес белок представляет собой антитело или слитый белок.
7. Способ по любому из пп.1-6, при котором представляющий интерес белок получают в указанной второй клеточной культуре с титром, превышающим титр, получаемый в идентичной в других отношениях клеточной культуре при идентичных в других отношениях условиях за исключением того, что перенос указанных клеток во вторую клеточную культуру происходит до того, как в первой клеточной культуре произошел метаболический сдвиг на потребление лактата.
8. Способ по п.7, при котором представляющий интерес белок получают в указанной второй клеточной культуре с титром, превышающим по меньшей мере в 2 раза титр, получаемый в идентичной в других отношениях клеточной культуре при идентичных в других отношениях условиях за исключением того, что перенос указанных клеток во вторую клеточную культуру происходит до того, как в первой клеточной культуре произошел метаболический сдвиг на потребление лактата.
9. Способ по п.7, при котором представляющий интерес белок получают в указанной второй клеточной культуре с титром, превышающим по меньшей мере в 2 раза, или в 2,5 раза, или в 3 раза, или в 4 раза, или в 5 раз, или вплоть до в 10 раз титр, получаемый в идентичной в других отношениях клеточной культуре при идентичных в других отношениях условиях за исключением того, что перенос указанных клеток во вторую клеточную культуру происходит до того, как в первой клеточной культуре произошел метаболический сдвиг на потребление лактата.
10. Способ по любому из пп.1-9, при котором метаболический сдвиг на потребление лактата обнаруживают путем измерений значения рН, содержания лактата или основания в первой клеточной культуре.
11. Способ по любому из пп.1-9, при котором метаболический сдвиг на потребление лактата обнаруживают после увеличения значения рН в первой среде для культивирования клеток без добавления основания.
12. Способ по любому из пп.1-9, при котором метаболический сдвиг на потребление лактата обнаруживают, когда уровни содержания лактата выходят на плато в первой клеточной культуре.
13. Способ по любому из пп.1-9, при котором стадия определения метаболического сдвига предусматривает
(a) измерение рН в первой клеточной культуре;
(b) добавление основания для поддержания рН выше заданного нижнего предела;
(c) определение того, что значение рН превышает заданный нижний предел в течение последовательных временных интервалов; и
(d) прекращение добавления основания с определением тем самым, что в первой клеточной культуре произошел метаболический сдвиг на потребление лактата.
14. Способ по любому из пп.1-13, при котором метаболический сдвиг происходит в первой клеточной культуре на 3 день или через 3 дня роста клеток в первой клеточной культуре.
15. Способ по любому из пп.1-14, при котором клетки переносят после того, как клетки выходят из фазы логарифмического роста в первой клеточной культуре, или после того, как клетки достигли фазы стационарного роста в первой клеточной культуре.
16. Способ по любому из пп.1-15, при котором клетки переносят во вторую клеточную культуру при начальной плотности клеток, составляющей больше чем или равной 0,5´106 клеток/мл, или при начальной плотности клеток, составляющей 0,5-3,0´106 клеток/мл.
17. Способ по любому из пп.1-16, при котором первая клеточная культура представляет собой культуру в системе посевных ферментеров.
18. Способ по любому из пп.1-17, при котором вторая клеточная культура представляет собой производственную культуру.
19. Способ по любому из пп.1-18, при котором первая клеточная культура представляет собой культуру в системе посевных ферментеров, вторая клеточная культура представляет собой производственную культуру и культивирование второй клеточной культуры проводят в другом сосуде для культивирования, чем первой клеточной культуры.
20. Способ по любому из пп.1-19, при котором культивирование второй клеточной культуры проводят в производственном биореакторе.
21. Способ по любому из пп.1-20, при котором клеточную популяцию в первой клеточной культуре переносят во вторую клеточную культуру, так что первая клеточная культура представляет собой фракцию второй клеточной культуры.
22. Способ по любому из пп.1-21, при котором последовательность нуклеиновой кислоты стабильно интегрирована в клеточный геном клеток.
23. Способ по любому из пп.1-21, при котором клетки содержат один или несколько векторов, кодирующих представляющий интерес белок.
24. Способ по любому из пп.1-23, при котором метаболический сдвиг на потребление лактата в первой клеточной культуре включает метаболический сдвиг на чистое потребление лактата.