(57) 1. Способ определения стехиометрии белковых компонентов вирусного капсида вирусной частицы, включающий:
жидкостную хроматографию гидрофильного взаимодействия (HILIC) образца вирусных частиц для разделения белковых компонентов вирусного капсида вирусных частиц;
определение масс белковых компонентов вирусного капсида для идентификации белковых компонентов, разделенных HILIC;
определение относительного содержания белковых компонентов вирусного капсида после разделения HILIC с определением, тем самым, стехиометрии белковых компонентов вирусного капсида вирусной частицы.
2. Способ по п.1, в котором вирусная частица содержит частицу аденоассоциированного вируса (AAV).
3. Способ по п.2, в котором белковые компоненты белкового капсида содержат VP1, VP2 и VP3 частицы AAV.
4. Способ по п.2, в котором массы VP1, VP2 и VP3 сравнивают с теоретическими массами одного или более из следующих капсидов: капсида AAV1, капсида AAV2, капсида AAV3, капсида AAV4, капсида AAV5, капсида AAV6, капсида AAV7, капсида AAV8, капсида AAVrh8, капсида AAV9, капсида AAV10, капсида AAV11, капсида AAV12 или их варианта.
5. Способ по п.3, в котором частица AAV содержит капсид AAV1, капсид AAV2, капсид AAV3, капсид AAV4, капсид AAV5, капсид AAV6, капсид AAV7, капсид AAV8, капсид AAVrh8, капсид AAV9, капсид AAV10, капсид AAV11, капсид AAV12 или их вариант.
6. Способ по п.2, в котором частица AAV содержит AAV1 ITR, AAV2 ITR, AAV3 ITR, AAV4 ITR, AAV5 ITR, AAV6 ITR, AAV7 ITR, AAV8 ITR, AAV9 ITR, AAV10 ITR, AAV11 ITR или AAV12 ITR.
7. Способ по п.2, в котором частица AAV представляет собой рекомбинантную частицу AAV (rAAV) или вектор AAV, кодирующие гетерологичный трансген.
8. Способ по п.2, в котором частица AAV имеет серотип капсида, выбранный для трансдукции клеток печени субъекта.
9. Способ по п.8, в котором частица AAV имеет серотип капсида AAV7, AAV8 или AAV9.
10. Способ по п.9, в котором частица AAV имеет серотип капсида AAV9.
11. Способ по п.2, в котором частица AAV имеет серотип капсида AAV9 и представляет собой вирусный вектор, кодирующий лизосомальную альфа-глюкозидазу (GAA), связанную с антителом анти-CD63.
12. Способ по п.1, в котором вирусная частица содержит вирусный вектор, кодирующий гетерологичный трансген или принадлежит к семейству вирусов, выбранных из группы, состоящей из Adenoviridae, Parvoviridae, Retroviridae, Baculoviridae и Herpesviridae.
13. Способ по п.12, в котором вирусная частица принадлежит к роду вирусов, выбранному из группы, состоящей из атаденовируса, авиаденовируса, ихтаденовируса, мастаденовируса, сиаденовируса, амбиденсовируса, бревиденсовируса, гепанденсовируса, итераденсовируса, пенстилденсовируса, амдопарвовируса, авепарвовируса, бокапарвовируса, копипарвовируса, депендопарвовируса, эритропарвовируса, протопарвовируса, тетрапарвовируса, альфаретровируса, бетаретровируса, дельтаретровируса, эпсилонретровируса, гаммаретровируса, лентивируса, спумавируса, альфабакуловируса, бетабакуловируса, дельтабакуловируса, гаммабакуловируса, илтовируса, мардивируса, симплексвируса, варицелловируса, цитомегаловируса, муромегаловируса, пробосцивируса, розеоловируса, лимфокриптовируса, макавируса, перкавируса и радиновируса.
14. Способ по п.12, в котором Retroviridae представляет собой вирус саркомы мышей Молони (MoMSV), вирус саркомы мышей Харви (HaMuSV), вирус опухоли молочной железы мышей (MuMTV), вирус лейкоза обезьян гиббонов (GaLV), вирус лейкоза кошек (FLV), спумавирус, вирус Фрэнд, вирус стволовых клеток мыши (MSCV), вирус саркомы Рауса (RSV), вирусы T-клеточного лейкоза человека, вирус иммунодефицита человека (HIV), вирус иммунодефицита кошек (FIV), вирус иммунодефицита лошадей (EIV), вирус висна-маэди; вирус артрита-энцефалита коз; вирус инфекционной анемии лошадей; вирус иммунодефицита кошек (FIV); вирус иммунодефицита крупного рогатого скота (BIV) или вирус иммунодефицита обезьян (SIV).
15. Способ по п.1, в котором в HILIC используют подвижную фазу A, содержащую трифторуксусную кислоту в воде, или подвижную фазу B, содержащую трифторуксусную кислоту в ацетонитриле.
16. Способ по п.13, в котором подвижная фаза A или подвижная фаза В содержат около 0,1% трифторуксусной кислоты.
17. Способ по п.15, в котором доля подвижной фазы A в хроматографии со временем увеличивается.
18. Способ по п.17, в котором подвижная фаза A увеличивается от около 15% до около 100% в течение около 45 минут.
19. Способ определения гетерогенности белковых компонентов в капсиде интактной вирусной частицы, включающий:
жидкостную хроматографию гидрофильного взаимодействия (HILIC) интактной вирусной частицы для разделения белковых компонентов капсида вирусной частицы;
определение масс белковых компонентов белкового капсида;
сравнение определенных масс белковых компонентов капсида вирусных частиц с теоретическими массами, при этом отклонение одной или более масс белковых компонентов капсида вирусных частиц от теоретических масс указывает на гетерогенность капсида.
20. Способ по п.19, в котором гетерогенность включает одно или более из смешанных серотипов, вариантных капсидов, аминокислотных замен капсидов, усеченных капсидов или модифицированных капсидов.

---