Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 045282

   Библиографические данные
(11)045282    (13) B1
(21)202092799

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2023.11.10
Текущий бюллетень: 2023-11  
Все публикации: 045282  
Реестр евразийского патента: 045282  

(22)2019.05.21
(51) C12N 9/10 (2006.01)
C12N 15/52 (2006.01)
C12P 33/00(2006.01)
(43)A1 2021.03.01 Бюллетень № 03  тит.лист, описание  последовательности 
(45)B1 2023.11.10 Бюллетень № 11  тит.лист, описание  последовательности 
(31)00627/18
(32)2018.05.22
(33)CH
(86)EP2019/063076
(87)2019/224187 2019.11.28
(71)ДСМ АЙПИ АССЕТС Б.В. (NL)
(72)Фаррел Кристофер Марк, Лапраде Лиза Энн (US), Леман Отто Мартин (CH), Трухарт Джошуа (US)
(73)ДСМ АЙПИ АССЕТС Б.В. (NL)
(74)Фелицына С.Б. (RU)
(54)МОДИФИЦИРОВАННЫЕ СТЕРОЛ-АЦИЛТРАНСФЕРАЗЫ
   Формула 
(57) 1. Модифицированный фермент, обладающий стерол-ацилтрансферазной активностью, выбранный из ЕС 2.3.1.26, содержащий одну или несколько аминокислотных замен в положениях, соответствующих аминокислотным остаткам, выбранным из 592 и/или 595 в полипептиде с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, где аминокислота в положении 592 в полипептиде SEQ ID NO: 1 или в соответствующем положении стерол-ацилтрансферазы 1 млекопитающих, дрожжей или растений (ARE1) представляет собой лейцин, и/или аминокислота в положении 595 в полипептиде SEQ ID NO: 1 или в соответствующем положении стерол-ацилтрансферазы 1 (ARE1) млекопитающих, дрожжей или растений представляет собой аспарагиновую кислоту.
2. Модифицированный фермент по п.1, в котором аминокислотная замена выбрана из F592L и/или G595D.
3. Вырабатывающая стеролы клетка дрожжей, содержащая и экспрессирующая модифицированный фермент по любому из пп.1 или 2.
4. Клетка дрожжей по п.3, вырабатывающая холестерин.
5. Применение клетки дрожжей по п.3 или 4 для получения смеси стеролов, содержащей 7-DHC и зимостерол, где соотношение 7-DHC к зимостеролу повышается по меньшей мере на 15% по сравнению с клеткой, экспрессирующей немодифицированный фермент.
6. Клетка дрожжей по п.3 или 4, в которой инактивированы эндогенные гены, экспрессирующие стеролдесатуразу С-22 (ERG5) и дельта-(24)-стерол-С-метилтрансферазу (ERG6).
7. Клетка дрожжей по любому из пп.3, 4 или 6, которая экспрессирует гетерологичный фермент, выбранный из ЕС 1.3.1.72, обладающий активностью стерол-D24-редуктазы, причем предпочтительно гетерологичный фермент происходит из растений или позвоночных.
8. Клетка дрожжей по любому из пп.3, 4, 6 или 7, которая выбрана из группы, состоящей из Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Pichia, Kluyveromyces, Hansenula и Yarrowia.
9. Способ снижения содержания зимостерола в смеси стеролов, содержащей зимостерол и 7-DHC, включающий культивирование клетки дрожжей по любому из пп.3, 4, 6, 7 или 8 в соответствующих условиях.
10. Способ повышения содержания 7-DHC в смеси стеролов, содержащей 7-DHC и зимостерол, включающий культивирование клетки дрожжей по любому из пп.3, 4, 6, 7 или 8 в соответствующих условиях.
11. Способ по п.9 или 10, дополнительно включающий выделение и/или очистку 7-DHC из смеси стеролов.
12. Способ получения 7-DHC, включающий ферментативное превращение ацетил-СоА в смесь стеролов, содержащую зимостерол и 7-DHC, используя клетку дрожжей по любому из пп.3, 4, 6, 7 или 8, где содержание 7-DHC в смеси стеролов составляет по меньшей мере 70%.
13. Способ по п.12, где 7-DHC дополнительно превращается в витамин D3.
14. Способ по п.12 или 13, где 7-DHC дополнительно превращается в 25-гидроксивитамин D3.
15. Применение модифицированного фермента по п.1 или 2 в способе получения 7-DHC, где указанный модифицированный фермент экспрессируется в стерол-продуцирующей клетке дрожжей, где 7-DHC выделяют из смеси стеролов, содержащей зимостерол и 7-DHC, и где соотношение 7-DHC к зимостеролу повышается по меньшей мере на 15% по сравнению со способом с использованием соответствующего немодифицированного фермента, экспрессирующегося в соответствующей немодифицированной клетке дрожжей.