Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 045394

   Библиографические данные
(11)045394    (13) B1
(21)202192652

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел:      


Документ опубликован 2023.11.22
Текущий бюллетень: 2023-11  
Все публикации: 045394  
Реестр евразийского патента: 045394  

(22)2020.03.24
(51) C40B 40/06 (2006.01)
C12N 15/10 (2006.01)
C12N 15/63 (2006.01)
C12P 19/34(2006.01)
(43)A1 2022.01.12 Бюллетень № 01  тит.лист, описание  последовательности 
(45)B1 2023.11.22 Бюллетень № 11  тит.лист, описание  последовательности 
(31)2019-069798
(32)2019.04.01
(33)JP
(86)JP2020/013133
(87)2020/203496 2020.10.08
(71)НЭШНЛ ЮНИВЕРСИТИ КОРПОРЕЙШН КОБЕ ЮНИВЕРСИТИ (JP)
(72)Цуге Кендзи, Исии Дзун, Кондо Акихико (JP)
(73)НЭШНЛ ЮНИВЕРСИТИ КОРПОРЕЙШН КОБЕ ЮНИВЕРСИТИ (JP)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ ХИМЕРНОЙ ПЛАЗМИДНОЙ БИБЛИОТЕКИ
   Формула 
(57) 1. Способ получения фрагмента ДНК, причем фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, содержащий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в хозяине; и ДНК-вставку, в которой единичные ДНК связаны, отличающийся тем, что способ включает:
(А) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, в котором связано множество типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; и
(В) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК.
2. Способ по п.1, где указанный фрагмент ДНК представляет собой фрагмент ДНК для трансформации клетки.
3. Способ по п.2, где указанный ориджин репликации эффективен в микроорганизме-хозяине и указанный фрагмент ДНК для трансформации клетки предназначен для трансформации микробной клетки.
4. Способ по любому из пп.1-3, дополнительно включающий приготовление указанного множества типов плазмид перед стадией (А).
5. Способ по любому из пп.1-3, где указанное множество типов плазмид приготовлено способом OGAB.
6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что все соотношения между молярными концентрациями для фрагментов ДНК в указанном множестве типов растворов со смесями единичных ДНК, полученных на стадии (А), составляют от 0,8 до 1,2.
7. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что в указанном множестве типов плазмид количество типов единичных ДНК, содержащихся в одном типе элемента ДНК-вставки, составляет от 3 до 60.
8. Способ по любому из пп.1-3, где количество типов ферментов рестрикции, используемых на стадии (А), составляет три или менее.
9. Способ по любому из пп.1-3, где фермент рестрикции представляет собой фермент рестрикции, который образует выступающий конец.
10. Плазмида, содержащая фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп. 1-3.
11. Способ получения фрагмента ДНК, причем фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, содержащий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в хозяине; и ДНК-вставку, в которой связаны единичные ДНК, отличающийся тем, что способ включает:
(А') приготовление множества типов плазмид, содержащих фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп.1-3;
(В') обработку множества типов плазмид, приготовленного на стадии (А'), ферментом рестрикции, пригодным для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; и
(С) повторную сборку указанного множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием растворов со смесями единичных ДНК, полученных на стадии (В'), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК.
12. Способ по п.11, отличающийся селекцией множества типов плазмид, содержащих полученный фрагмент длинноцепочечной ДНК, и повторным применением плазмид в качестве плазмид на стадии (В').
13. Способ конструирования химерной плазмидной библиотеки, включающий использование способа по любому из пп.1-3.
14. Способ трансформации клеток, включающий трансформацию клетки фрагментом ДНК, полученным способом по любому из пп.1-3.
15. Композиция для трансформации клеток, содержащая фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп.1-3.
16. Способ трансформации клетки представляющим интерес фрагментом ДНК, где указанный фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, включающий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в указанной клетке в качестве хозяина; и ДНК-вставку, где указанная ДНК-вставка образована путем связывания множества типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, где указанный способ включает
(A) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК;
(B) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК; и
(C) трансформацию указанной клетки указанным фрагментом длинноцепочечной ДНК.
17. Способ получения клетки, содержащей представляющий интерес фрагмент ДНК, где указанный фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, включающий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в указанной клетке в качестве хозяина; и ДНК-вставку, где указанная ДНК-вставка образована путем связывания множества типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, где указанный способ включает
(А) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК;
(B) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК; и
(C) трансформацию указанной клетки указанным фрагментом длинноцепочечной ДНК.