Евразийский сервер публикаций
Евразийский патент № 045394
Библиографические данные | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Формула | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
(57) 1. Способ получения фрагмента ДНК, причем фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, содержащий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в хозяине; и ДНК-вставку, в которой единичные ДНК связаны, отличающийся тем, что способ включает:
(А) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, в котором связано множество типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; и (В) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК. 2. Способ по п.1, где указанный фрагмент ДНК представляет собой фрагмент ДНК для трансформации клетки. 3. Способ по п.2, где указанный ориджин репликации эффективен в микроорганизме-хозяине и указанный фрагмент ДНК для трансформации клетки предназначен для трансформации микробной клетки. 4. Способ по любому из пп.1-3, дополнительно включающий приготовление указанного множества типов плазмид перед стадией (А). 5. Способ по любому из пп.1-3, где указанное множество типов плазмид приготовлено способом OGAB. 6. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что все соотношения между молярными концентрациями для фрагментов ДНК в указанном множестве типов растворов со смесями единичных ДНК, полученных на стадии (А), составляют от 0,8 до 1,2. 7. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что в указанном множестве типов плазмид количество типов единичных ДНК, содержащихся в одном типе элемента ДНК-вставки, составляет от 3 до 60. 8. Способ по любому из пп.1-3, где количество типов ферментов рестрикции, используемых на стадии (А), составляет три или менее. 9. Способ по любому из пп.1-3, где фермент рестрикции представляет собой фермент рестрикции, который образует выступающий конец. 10. Плазмида, содержащая фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп. 1-3. 11. Способ получения фрагмента ДНК, причем фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, содержащий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в хозяине; и ДНК-вставку, в которой связаны единичные ДНК, отличающийся тем, что способ включает: (А') приготовление множества типов плазмид, содержащих фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп.1-3; (В') обработку множества типов плазмид, приготовленного на стадии (А'), ферментом рестрикции, пригодным для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; и (С) повторную сборку указанного множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием растворов со смесями единичных ДНК, полученных на стадии (В'), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК. 12. Способ по п.11, отличающийся селекцией множества типов плазмид, содержащих полученный фрагмент длинноцепочечной ДНК, и повторным применением плазмид в качестве плазмид на стадии (В'). 13. Способ конструирования химерной плазмидной библиотеки, включающий использование способа по любому из пп.1-3. 14. Способ трансформации клеток, включающий трансформацию клетки фрагментом ДНК, полученным способом по любому из пп.1-3. 15. Композиция для трансформации клеток, содержащая фрагмент ДНК, полученный способом по любому из пп.1-3. 16. Способ трансформации клетки представляющим интерес фрагментом ДНК, где указанный фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, включающий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в указанной клетке в качестве хозяина; и ДНК-вставку, где указанная ДНК-вставка образована путем связывания множества типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, где указанный способ включает (A) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; (B) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК; и (C) трансформацию указанной клетки указанным фрагментом длинноцепочечной ДНК. 17. Способ получения клетки, содержащей представляющий интерес фрагмент ДНК, где указанный фрагмент ДНК имеет по меньшей мере один элемент ДНК-вставки, включающий: ДНК, содержащую ориджин репликации, эффективный в указанной клетке в качестве хозяина; и ДНК-вставку, где указанная ДНК-вставка образована путем связывания множества типов единичных ДНК, способных быть связанными в определенном порядке связывания, где указанный способ включает (А) обработку множества типов плазмид, содержащих элемент ДНК-вставки, с использованием фермента рестрикции, пригодного для каждой плазмиды, для расщепления указанных плазмид на множество типов единичных ДНК и получения множества типов растворов со смесями единичных ДНК; (B) повторную сборку множества типов единичных ДНК способом OGAB с использованием множества типов растворов со смесями единичных ДНК, полученного на стадии (А), с получением фрагмента длинноцепочечной ДНК; и (C) трансформацию указанной клетки указанным фрагментом длинноцепочечной ДНК. Загрузка данных... ![]()
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||