Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 045463

   Библиографические данные
(11)045463    (13) B1
(21)202091296

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2023.11.28
Текущий бюллетень: 2023-11  
Все публикации: 045463  
Реестр евразийского патента: 045463  

(22)2019.01.29
(51) C07K 14/33 (2006.01)
A61K 39/08(2006.01)
(43)A1 2020.10.23 Бюллетень № 10  тит.лист, описание  последовательности 
(45)B1 2023.11.28 Бюллетень № 11  тит.лист, описание  последовательности 
(31)18153941.2
(32)2018.01.29
(33)EP
(86)EP2019/052146
(87)2019/145577 2019.08.01
(71)ИПСЕН БИОФАРМ ЛИМИТЕД (GB)
(72)Бинц Томас, Сикорра Стефан (GB)
(73)ИПСЕН БИОФАРМ ЛИМИТЕД (GB)
(74)Медведев В.Н. (RU)
(54)РАСЩЕПЛЯЮЩИЕ НЕНЕЙРОННЫЙ SNARE БОТУЛИНИЧЕСКИЕ НЕЙРОТОКСИНЫ
   Формула 
(57) 1. Модифицированная протеаза L-цепи ботулинического нейротоксина A (BoNT/A), которая демонстрирует расщепление человеческого SNAP-23 (hSNAP-23) с повышенной эффективностью по сравнению с L-цепью BoNT дикого типа (SEQ ID NO: 1), имеющая модифицированную аминокислотную последовательность по сравнению с L-цепью BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1), которая содержит:
a) по меньшей мере, одну замену аминокислотного остатка, расположенного в первом связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A для связывания с сайтом связывания P182/D178 hSNAP-23;
b) где указанный первый связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком E148 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная, по меньшей мере, одна замена аминокислотного остатка включает аминокислоту тирозин в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку E148 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
2. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по п.1, дополнительно содержащая:
a) замену аминокислотного остатка, расположенного во втором связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания D189/D192 hSNAP-23;
b) где указанный второй связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком Q29 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная замена аминокислотного остатка включает в себя:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из аланина, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку Q29 L-цепи BoNT А дикого типа (SEQ ID NO: 1).
3. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по п.1 или 2, дополнительно содержащая:
a) замену аминокислотного остатка, расположенного в третьем связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания I198 hSNAP-23;
b) где указанный третий связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком K166 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная замена аминокислотного остатка включает в себя:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из фенилаланина и валина, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку K166 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
4. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая:
a) по меньшей мере, одну замену аминокислотного остатка, расположенного в четвертом связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания K185 hSNAP-23;
b) где указанный четвертый связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком G305 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная, по меньшей мере, одна замена аминокислотного остатка включает в себя:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из глутамата и аспартата, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку G305 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
5. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая:
a) замену аминокислотного остатка, расположенного в пятом связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания R186 hSNAP-23;
b) где указанный пятый связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком S143 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная замена аминокислотного остатка включает в себя:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из глутамина, глутамата и аспартата, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку S143 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
6. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая:
a) по меньшей мере, одну замену аминокислотного остатка, расположенного в шестом связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания K206 hSNAP-23;
b) где указанный шестой связывающий карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком Y251 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная, по меньшей мере, одна замена аминокислотного остатка включает в себя:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из глутамата и аспартата, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку Y251 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
7. Модифицированная протеаза L-цепи BoNT/A по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая:
a) замену аминокислотного остатка, расположенного в седьмом связывающем кармане протеазы L-цепи BoNT/A, для связывания с сайтом связывания D210 hSNAP-23;
b) где указанный связывающий седьмой карман протеазы L-цепи BoNT/A определяется аминокислотным остатком S254 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1);
c) и где указанная замена аминокислотного остатка включает:
i) аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из аланина, в положении в модифицированной аминокислотной последовательности протеазы L-цепи, которое соответствует аминокислотному остатку S254 L-цепи BoNT/A дикого типа (SEQ ID NO: 1).
8. Вектор, включающий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую модифицированную протеазу L-цепи BoNT/A по любому из предшествующих пунктов.
9. Средство доставки, содержащее:
a) модифицированную протеазу L-цепи BoNT/A по любому из пп.1-7 или вектор по п.8; и
b) средство для доставки указанной модифицированной протеазы L-цепи BoNT/A или указанного вектора в клетку-мишень, где средство b) для доставки указанной модифицированной протеазы L-цепи BoNT/A в клетку-мишень содержит:
i) нацеливающий фрагмент, который связывает средство доставки с клеткой-мишенью; и
ii) транслокационный пептид, который транслоцирует модифицированную протеазу L-цепи BoNT/A или конструкцию нуклеиновой кислоты в клетку-мишень.
10. Средство доставки по п.9, где указанная клетка-мишень представляет собой клетку-мишень, не являющуюся нейроном.
11. Способ расщепления hSNAP-23 in vitro, включающий приведение hSNAP-23 в контакт с протеазой L-цепи (BoNT/A) по любому из пп.1-7 или со средством доставки по п.9 или 10, где указанное средство доставки содержит модифицированную протеазу L-цепи BoNT/A по любому из пп.1-7.
12. Применение протеазы L-цепи (BoNT/A) по любому из пп.1-7 или средства доставки по п.9 или 10, которое содержит модифицированную протеазу L-цепи BoNT/A по любому из пп.1-7, в качестве лекарственного средства.