Евразийский сервер публикаций

Евразийский патент № 045492

   Библиографические данные
(11)045492    (13) B1
(21)201892288

 A ]   B ]   C ]   D ]   E ]   F ]   G ]   H ] 

Текущий раздел: C     


Документ опубликован 2023.11.29
Текущий бюллетень: 2023-11  
Все публикации: 045492  
Реестр евразийского патента: 045492  

(22)2017.04.12
(51) C12N 15/82 (2006.01)
C12N 9/02(2006.01)
(43)A1 2019.04.30 Бюллетень № 04  тит.лист, описание 
(45)B1 2023.11.29 Бюллетень № 11  тит.лист, описание  последовательности 
(31)10 2016 106 656.7
(32)2016.04.12
(33)DE
(86)EP2017/058815
(87)2017/178541 2017.10.19
(71)КВС ЗААТ СЕ (DE)
(72)Борхардт Дитрих, Чарнецки Олаф, Мехелке Вольфганг (DE)
(73)КВС ЗААТ СЕ (DE)
(74)Вашук Т.В., Емельянова В.А., Королева С.В. (BY)
(54)ЯДЕРНО-КОДИРУЕМАЯ МУЖСКАЯ СТЕРИЛЬНОСТЬ КАК РЕЗУЛЬТАТ МУТАЦИИ ЦИТОХРОМ P450 ОКСИДАЗЫ
   Формула 
(57) 1. Растение Beta vulgaris, проявляющее рецессивный ядерно-кодируемый мужской стерильный фенотип, отличающееся тем, что по сравнению с соответствующим (мужским фертильным) растением дикого типа Beta vulgaris данный фенотип обусловливается мутацией гена эндогенной цитохром Р450 оксидазы либо отсутствием, или низким содержанием, или активностью функционального белка цитохром Р450 оксидазы, кодируемого геном дикого типа цитохром Р450 оксидазы, при этом ген цитохром Р450 оксидазы представляет собой ген, выбираемый из группы, состоящей из
(a) нуклеотидной последовательности, содержащей SEQ ID NO: 1 или 2;
(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; или
(c) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность, которая идентична по крайней мере на 80% аминокислотной последовательности в SEQ ID NO: 3,
при этом мутация представляет собой делецию в кодирующей нуклеотидной последовательности гена CYPgst, сигнале сплайсинга или регуляторной последовательности, представленной, по меньшей мере, последовательностью промотора, гена CYPgst, при этом делеция в Beta vulgaris может быть обнаружена посредством отсутствия маркерного локуса sle5983d14, определяемого посредством продукта амплификации с длиной, ограниченной размерами праймеров к последовательностям SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, или маркерного локуса sle5983d17, определяемого посредством продукта амплификации с длиной, ограниченной размерами праймеров к последовательностям SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, или обоих указанных локусов и посредством наличия убиквитинового маркера,
при этом мутация предотвращает транскрипцию и/или трансляцию функционального белка.
2. Растение по п.1, отличающееся тем, что оно является гетерозиготным по мутации и мужским фертильным или гомозиготным по мутации и мужским стерильным, при этом образование пыльцы супрессируется у стерильного растения.
3. Растение по п.1, отличающееся тем, что ген располагается в сегменте на хромосоме 1 между маркерными локусами snx2151s01 и sle3305s02, где маркерная последовательность snx2151s01 в SEQ ID NO: 24 и маркерная последовательность sle3305s02 в SEQ ID NO: 26 обозначают присутствие локуса gst, а маркер snx2151s01 в SEQ ID NO: 25 и маркерная последовательность sle3305s02 в SEQ ID NO: 27 обозначают стандартную последовательность.
4. Растение по п.1, отличающееся тем, что не мутировавший ген (ген дикого типа) имеет нуклеотидную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
(а) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2;
(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3.
5. Молекула нуклеиновой кислоты или рекомбинантная молекула ДНК, содержащая нуклеотидную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
(a) нуклеотидной последовательности, содержащей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2;
(b) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; и
(c) нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность, которая содержит как минимум одну аминокислотную делецию, замещение, присоединение и/или инсерцию в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3 и которая идентична по меньшей мере на 90% аминокислотной последовательности по всей ее длине,
где нуклеиновая кислота дополнительно содержит мутацию в форме делеции, при этом мутация представляет собой делецию в кодирующей нуклеотидной последовательности гена CYPgst, сигнале сплайсинга или регуляторной последовательности, представленной, по меньшей мере, последовательностью промотора, гена CYPgst, при этом делеция в Beta vulgaris может быть обнаружена посредством отсутствия маркерного локуса sle5983d14, определяемого посредством продукта амплификации с длиной, ограниченной размерами праймеров к последовательностям SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, или маркерного локуса sle5983d17, определяемого посредством продукта амплификации с длиной, ограниченной размерами праймеров к последовательностям SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, или обоих указанных локусов и посредством наличия убиквитинового маркера,
при этом мутация предотвращает транскрипцию и/или трансляцию функционального белка.
6. Рекомбинантная молекула ДНК, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы: нуклеотидная последовательность 1762-2679 из SEQ ID NO: 1; нуклеотидная последовательность 3507-4142 из SEQ ID NO: 1; нуклеотидная последовательность 244-1161 из SEQ ID NO: 2; или нуклеотидная последовательность 1161-1787 в SEQ ID NO: 2, которая кодирует малую шпилечную РНК (shRNA), малую интерферирующую РНК (siRNA) или двуцепочечную РНК, которая после экспрессии или введения в растительную клетку Beta vulgaris приводит к ингибированию экспрессии функционального гена цитохром Р450 оксидазы, представленного в растении по п.1.
7. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты либо рекомбинантную молекулу ДНК по п.5.
8. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты или рекомбинантную молекулу ДНК по п.5.
9. Способ получения растения, которое проявляет рецессивный, ядерно-кодируемый гомозиготный мужской стерильный фенотип, отличающийся тем, что экспрессия гена цитохром Р450 оксидазы ингибируется, тем, что включает этап введения рекомбинантной молекулы ДНК по п.6.
10. Способ восстановления фертильности растения по п.1, отличающийся тем, что включает введение функционального гена цитохром Р450 оксидазы в растение Beta vulgaris.
11. Орган, часть растения или ткань растения по п.1.
12. Клетка растения по п.1.
13. Способ идентификации растения по п.1, отличающийся тем, что обеспечивает обнаружение мутации гена цитохром Р450 оксидазы или маркера, связанного с мутацией.
14. Вектор по п.7, отличающийся тем, что представляет собой вектор для растений.