(57) 1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с CD47 и включает:
а) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит последовательности CDR1, CDR2, CDR3,
где CDR1 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1,
где CDR2 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 6-9, 11-12,
где CDR3 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 17, и
б) вариабельный домен легкой цепи, который содержит последовательности CDR1, CDR2, CDR3,
где CDR1 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 22-25, 28-30 или 32,
CDR2 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 36-38, 40, 42-43, 45 или 48,
CDR3 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 50-51, 53, 56, 58-59, 61 или 64.
2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, характеризующееся тем, что антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, представляет собой Fab, scFv, scFab.
3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где вариабельный домен тяжелой цепи содержит последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 66-82, 84-85.
4. Моноклональное антитело по п.1, где вариабельный домен легкой цепи, который содержит последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 89-90, 92, 95, 97-98, 100-103 или 106.
5. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, включающее:
а) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательности, выбранные из следующей группы SEQ ID NO: 66-82, 84-85, и
б) вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательности, выбранные из следующей группы SEQ ID NO: 89-90, 92, 95, 97-98, 100-103 или 106.
6. Моноклональное антитело по п.1, характеризующееся тем, что антитело представляет собой полноразмерное антитело.
7. Моноклональное антитело по п.1, характеризующееся тем, что оно содержит Fc-фрагмент по меньшей мере с одной мутацией или модификацией, которая повышает антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и/или комплементзависимую цитотоксичность (CDC) по сравнению с тем же антителом без мутации или модификации.
8. Моноклональное антитело по п.1, где антитело, которое специфически связывается с CD47, представляет собой полноразмерное антитело IgG.
9. Моноклональное антитело по п.8, где полноразмерное антитело IgG относится к изотипу IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 человека.
10. Моноклональное антитело по п.9, где полноразмерное антитело IgG относится к изотипу IgG1 человека.
11. Биспецифическое антитело, которое специфически связывается с CD47 и PD-L1 и включает:
а) первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47;
б) второй антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-L1;
в) Fc-фрагмент,
при этом первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, включает:
i) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит последовательности CDR1, CDR2, CDR3,
где CDR1 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1,
где CDR2 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 6-9, 11-12,
где CDR3 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 17, и
ii) вариабельный домен легкой цепи, который содержит последовательности CDR1, CDR2, CDR3,
где CDR1 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 22-25, 28-30 или 32,
CDR2 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 36-38, 40, 42-43, 45 или 48,
CDR3 представляет собой последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 50-51, 53, 56, 58-59, 61 или 64.
12. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, представляет собой Fab, scFv, scFab.
13. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что второй антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-L1, представляет собой Fab, scFv, scFab.
14. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что антитело представляет собой полноразмерное антитело.
15. Биспецифическое антитело по п.11, отличающееся тем, что первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, ингибирует взаимодействие CD47 рецептора и SIRP лиганда, и/или второй антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-L1, ингибирует взаимодействие PD-L1 с PD-1 рецептором.
16. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, включает вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 66-82, 84-85.
17. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, включает вариабельный домен легкой цепи, который содержит последовательность, выбранную из следующей группы SEQ ID NO: 89-90, 92, 95, 97-98, 100-103 или 106.
18. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что первый антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с CD47, включает:
а) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит последовательности, выбранные из следующей группы SEQ ID NO: 66-82, 84-85, и
б) вариабельный домен легкой цепи, который содержит последовательности, выбранные из следующей группы SEQ ID NO: 89-90, 92, 95, 97-98, 100-103 или 106.
19. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что второй антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-L1, включает:
а) вариабельный домен тяжелой цепи, который содержит следующие последовательности: SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 21, и
б) вариабельный домен легкой цепи, который содержит следующие последовательности: SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 65.
20. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что оно вызывает антителозависимую клеточную цитотоксичность, макрофаг-опосредованный фагоцитоз и/или опосредованную Т-клетками цитотоксичность в отношении клеток, несущих на поверхности антигены CD47 и/или PD-L1.
21. Биспецифическое антитело по п.11, характеризующееся тем, что оно содержит Fc-фрагмент по меньшей мере с одной мутацией или модификацией, которая повышает антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) и/или комплементзависимую цитотоксичность (CDC) по сравнению с тем же антителом без мутации или модификации.
22. Нуклеиновая кислота, которая кодирует биспецифическое антитело по любому из пп.11-21.
23. Нуклеиновая кислота по п.22, где нуклеиновая кислота представляет собой ДНК.
24. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.22, 23.
25. Способ получения клетки-хозяина для получения биспецифического антитела по любому из пп.11-21, включающий трансформирование клетки вектором по п.24.
26. Клетка-хозяин для получения биспецифического антитела по любому из пп.11-21, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.22, 23.
27. Способ получения биспецифического антитела по любому из пп.11-21, заключающийся в культивировании клетки-хозяина по п.26 в культуральной среде в условиях, достаточных для получения указанного антитела, с последующим выделением и очисткой полученного антитела.
28. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого PD-L1 и CD47, содержащая биспецифическое антитело по любому из пп.11-21 в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.
29. Фармацевтическая композиция по п.28, предназначенная для профилактики или лечения заболевания или нарушения, опосредуемого PD-L1 и CD47, выбранного из группы ПРГШ (плоскоклеточный рак головы и шеи), рак шейки матки, рак без выявленного первоисточника, глиобластома, рак пищевода, рак мочевого пузыря, ТНРМЖ (трижды негативный рак молочной железы), КРР (колоректальный рак), гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, НМРЛ (немелкоклеточный рак легкого), рак почки, рак яичника, MSI КРР (колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью), лейкоз (острый или миелобластный), лимфома, множественная миелома, рак молочной железы, рак предстательной железы, саркома, гепатоцеллюлярная карцинома, лимфома Ходжкина, Т- и В-клеточный острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточный рак лёгкого, острый миелобластный лейкоз, рефрактерная В-клеточная неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, крупноклеточная В-клеточная диффузная лимфома, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак яичника, острый миелобластный лейкоз и миелодиспластический синдром высокого риска.
30. Способ ингибирования биологической активности PD-L1 и/или CD47 у субъекта, нуждающегося в таком ингибировании, включающий введение субъекту эффективного количества биспецифического антитела по любому из пп.11-21.
31. Применение биспецифического антитела по любому из пп.11-21 для лечения у субъекта, нуждающегося в таком лечении, заболевания или нарушения, опосредуемого PD-L1 и CD47.
32. Применение антитела по п.31, где заболевание или нарушение выбрано из группы ПРГШ (плоскоклеточный рак головы и шеи), рак шейки матки, рак без выявленного первоисточника, глиобластома, рак пищевода, рак мочевого пузыря, ТНРМЖ (трижды негативный рак молочной железы), КРР (колоректальный рак), гепатоцеллюлярная карцинома, меланома, НМРЛ (немелкоклеточный рак легкого), рак почки, рак яичника, MSI КРР (колоректальный рак с высокой микросателлитной нестабильностью), лейкоз (острый или миелобластный), лимфома, множественная миелома, рак молочной железы, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак мочевого пузыря, саркома, гепатоцеллюлярная карцинома, глиобластома, лимфома Ходжкина, Т- и В-клеточный острый лимфобластный лейкоз, мелкоклеточный рак лёгкого, острый миелобластный лейкоз, рефрактерная В-клеточная неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, крупноклеточная В-клеточная диффузная лимфома, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак поджелудочной железы, рак яичника, острый миелобластный лейкоз и миелодиспластический синдром высокого риска.

---